時至今日，科技發(fā)展的速度如同插上了翅膀飛速向前，各種新技術(shù)層出不窮。借助新興科技力量，醫(yī)學(xué)發(fā)展也是一日千里，各種各樣的新興治療手段讓人目不暇接、眼花繚亂。然而“萬變不離其宗”--醫(yī)學(xué)歸根結(jié)底來說無非是疾病的診斷和治療兩個部分。作為疾病診斷“金標準”的病理診斷在整個醫(yī)療行為過程中舉足輕重，甚至很多時候會成為指導(dǎo)臨床治療方案的“燈塔”。
病理技術(shù)中最經(jīng)典的是石蠟包埋-HE染色制片技術(shù)。除此之外，我們在這一技術(shù)的基礎(chǔ)上還經(jīng)會常用到一些輔助實驗方法，或者叫做特殊檢查方法。這些實驗方法中有很多種具有操作簡單、方便快捷、結(jié)果可靠、價格低廉的優(yōu)點，卻在我們的病理診斷工作中解決了不少難題，起到了“四兩撥千斤”的效果。
一、連切、深切：“不知細葉誰裁出，二月春風(fēng)似剪刀”
病理學(xué)檢查主要是將手術(shù)切除標本制作成切片后在顯微鏡下觀察，從而對病變做出診斷。在病理診斷過程中，病變可能較為表淺也可能浸潤較深，或者僅觀察單一層面切片不足以確定病變性質(zhì)，只有看到組織不同深度或者連續(xù)變化才能得到最終結(jié)論。
這個時候，往往一個細小的動作就可以解決---連切、深切。連切是指在已經(jīng)切取切片的蠟塊上直接連續(xù)切片；深切是指在已經(jīng)切取切片的蠟塊上向深處修塊，再切片。
當(dāng)然這個細小的工作，猶如“春風(fēng)拂柳”般輕巧，同時報告也可能會稍稍延遲，需要臨床醫(yī)師和患者更多的諒解，但是對于診斷結(jié)果來說，會更加精確、更加完善。
二、特殊染色：“曾經(jīng)滄海難為水，除卻巫山不是云”
在病理學(xué)技術(shù)中，常規(guī)HE染色技術(shù)的染色效果對于細胞核、細胞質(zhì)區(qū)分很明顯，但對于組織中的一些特殊成分：如結(jié)締組織和肌纖維、病原微生物、病理性沉著物、色素、糖類、酶類等卻沒有辦法進行很好的區(qū)分，僅靠HE染色往往使很多相關(guān)疾病診斷成為難題。
這時就需要用到區(qū)別于HE染色的特殊染色方法，特殊染色是指應(yīng)用某些試劑或染料與組織細胞內(nèi)的化學(xué)成分進行特異性反應(yīng)或染料分子結(jié)構(gòu)的某些基團與組織內(nèi)的相應(yīng)基團特異性結(jié)合而顯色等原理。每種特殊成分有其對應(yīng)的特殊染色方式，從而呈現(xiàn)出不同的顯色結(jié)果。這種特殊成分與染色方式之間的對應(yīng)關(guān)系，猶如詩人對愛情忠貞的贊美：“曾經(jīng)滄海難為水，除卻巫山不是云”。
例如常用于顯示肝糖原的高碘酸-無色品紅（PAS）法。先用高碘酸氧化切片組織，使組織中含有己糖結(jié)構(gòu)的碳鍵打開，生成二醛；二醛再與無色品紅液結(jié)合生成紫紅色顆粒狀復(fù)合物定位于肝細胞胞質(zhì)中；從而證明糖類物質(zhì)的存在。用另外一張連續(xù)切片經(jīng)淀粉酶消化后（淀粉酶可以水解糖原）同時做PAS對照，如對照片呈陰性，就可確定陽性物為糖原。PAS染色可以確定肝細胞內(nèi)糖原的存在，通過觀察肝糖原在肝細胞的含量和分布及變化，可了解肝細胞的功能狀態(tài)。
三、免疫組化：“閑潭云影日悠悠，物換星移幾度秋”
在組織切片中，某些疾病的組織形態(tài)表現(xiàn)極其相似，單憑HE切片難以分辨。在病理學(xué)早期的發(fā)展過程中，對于這類疾病的診斷，只能憑借經(jīng)驗判斷，往往各個專家各執(zhí)一詞、莫衷一是，難以形成正確、統(tǒng)一的診斷，極大限制了病理學(xué)的診斷意義和價值。
于是免疫組化方法應(yīng)運而生，免疫組化方法基于抗原抗體特異性結(jié)合原理，而其獨特之處在于將其結(jié)合物像蝴蝶效應(yīng)那樣逐步放大，最終經(jīng)過顯色清晰的呈現(xiàn)出來，從而能夠?qū)崿F(xiàn)對組織和細胞內(nèi)的特定抗原和抗體進行定位、定向或半定量檢測。
免疫組織化學(xué)染色方法很多，但考慮到方法的特異性和敏感性、操作簡便性和價格等因素，現(xiàn)在臨床上大多采用的是LSAB（S-P）法。具體操作流程如下：
①.準備工作：抗原修復(fù)和內(nèi)源性酶的抑制。
抗原修復(fù)目的是將被封閉的抗原結(jié)合位點重新暴露；進行內(nèi)源性酶的抑制則是因為組織中的內(nèi)源性酶易與顯色物質(zhì)DAB結(jié)合，造成非特異性背景染色。
②.核心工作：抗原、抗體結(jié)合與結(jié)合物放大。
一抗工作液與組織中抗原特異性結(jié)合，生物素化（生物素化即生物素與抗體結(jié)合。生物素可以與多種酶結(jié)合，而不影響抗體與抗原結(jié)合的能力）二抗與一抗特異性結(jié)合，三抗酶復(fù)合物與生物素化二抗結(jié)合，使抗原抗體結(jié)合物放大。
③.收尾工作：顯色，常用DAB做顯色劑。
經(jīng)過一系列“物轉(zhuǎn)星移”的變化，就可以把不同組織、不同部位的特異性抗原標記出來，作為病理診斷的依據(jù)，從而大大提高了診斷準確性，促進了診斷的標準化和統(tǒng)一性。
除上述方法之外，還有電子顯微鏡檢查，可以通過研究生物組織的超微結(jié)構(gòu)來認識疾病的發(fā)生。因其多應(yīng)用于科研及教學(xué)，臨床上應(yīng)用較少，在此不再贅述。新時代下的醫(yī)學(xué)發(fā)展，分子病理領(lǐng)域不斷發(fā)展，分子病理學(xué)技術(shù)作為新興的病理學(xué)診斷輔助技術(shù)之一，隨著技術(shù)的穩(wěn)定成熟，也越來越廣泛應(yīng)用于臨床病理診斷中；人工智能異軍突起，新的思維方式、觀念讓人們不斷沖破傳統(tǒng)的禁錮；更高的經(jīng)濟發(fā)展水平、更多樣化生活方式對醫(yī)療水平、醫(yī)療服務(wù)提出了更高、更多元化的要求。
總之，在疑難病例的診斷過程中常常會用到以上特殊檢查方法。根據(jù)不同的診斷需要，靈活的選擇合適的檢查方法，是順利實現(xiàn)精準診斷的有效途徑。而且，這些特殊檢查方法的具體內(nèi)容也會越來越豐富。
“船到中流浪更急，人到半山路更陡”，我們將繼承病理前輩們篳路藍縷、披荊斬棘奠定的病理學(xué)學(xué)科基礎(chǔ)，充分發(fā)揮病理人的智慧，吸取最新的科技成果應(yīng)用到病理診斷的實際工作中，為臨床醫(yī)師的治療提供精準病理診斷，為人民群眾的健康保駕護航。（北京清華長庚醫(yī)院病理科高國強、楊江輝）
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